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Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应标准品的制备及应用研究
发布时间:2015-07-13 11:48:53来源:浏览:570次
【Author】 ZHANG Dan-fang,TANG Shi-jie,MAO Xiao-yan,XU Jin-hua,PENG Li-hong(Cleft Lip and Palate Treatment Center,The Second Affiliated Hospital,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China)
【机构】 汕头大学医学院第二附属医院唇腭裂中心; 汕头大学医学院第二附属医院唇腭裂中心 广东汕头515041; 广东汕头515041;
【摘要】 目的:制备用于Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准品。方法:提取胚胎上颌突组织总RNA,行逆转录反应获得第一链的cDNA,再通过PCR回收获得预期Satb2基因片段;通过T-A克隆将该片段插入pGMT质粒载体;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。结果:重组质粒经PCR扩增及序列测定表明,pGMT/Satb2基因已成功克隆。结论:所构建的pGMT/Satb2基因实时荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好,灵敏度和特异性高,准确可靠,此法可作为实时荧光定量PCR检测Satb2基因的标准方法。 
【关键词】 实时荧光定量聚合酶链反应; 标准品; Taqman探针; Satb2基因。
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